الجمعة، 28 أكتوبر، 2011

تحضير المواد المستخدمة في تجارب فسيولوجيا الحيوان


أولاً : المواد اللازمة لتجارب الكشف عن المواد (السكريات , البروتينات , الدهون )
1-      كاشف موليش : 5 جم ألفا-نافثول , تذاب في 250 ملل كحول إيثيلي.
2-      المحاليل قيد الدراسة (المحلول السكري , البروتين ) : تحضر بتركيز 2 – 3 % .
3-      فهلنج أ  : 70 جم من كبريتات النحاسII تذاب في لتر من الماء المقطر .
فهلنج ب : 173 جم طرطرات صوديوم-بوتاسيوم(ملح روشل) , 125 جم هيدروكسيد البوتاسيوم , تذاب في 500 ملل ماء مقطر .
   4- محلول بندكت : محلول (1) 173 جم سترات الصوديوم , 100 جم كربونات الصوديوم , تذاب في 800 ملل ماء مقطر ويسخن المحلول مع استمرار التقليب ثم رشح إذا لزم الأمر أكمل المحلول إلى 850         ملل , محلول (2) 17.3 جم كبريتات نحاس ,تذاب في 100 ملل ماء مقطر .
أضف محلول (1) إلى محلول (2) تدريجياً مع التقليب الجيد ثم أكمل المحلول إلى اللتر بالماء المقطر .
1-  كاشف بارفويد : 13.3 جم بلورات خلات النحاس , تذاب في 200 ملل ماء مقطر مع التقليب , أضف 1.8 ملل من حامض الخليك الثلجي .
2-         محلول اليود : 1 جم أيودين , 2 جم يوديد البوتاسيوم (يسحقان في هاون ) , ثم يذاب في 300 ملل ماء مقطر .
3-          حمض الهيدروكلوريك المخفف : 1 ملل من الحمض تذاب في 100 ملل ماء مقطر .
4-          محلول خلات الرصاص 2% : 2 جم خلات الرصاص , تذاب في 98 ملل ماء مقطر .
5-          محلول هيدروكسيد صوديوم 10 % : 10 جم هيدروكسيد الصوديوم , تذاب في 90 ملل ماء مقطر.
6-           كبريتات نحاس 0.5 % : 0.5 جم كبريتات نحاس تذاب في 100 ملل ماء مقطر .
7-           محلول هيدروكسيد الصوديوم 40% : 40 جم هيدروكسيد صوديوم تذاب في 100 ملل ماء مقطر.
8-           كربونات الصوديوم 5% : 5 جم كربونات صوديوم تذاب في 100 ملل ماء مقطر .
9-   فينول فيثالين الكحولي 0.25 % : 0.5 جم مسحوق فينول فيثالين تذاب في 104 ملل كحول إيثيلي مطلق ( تركيز 95 % ) مع 96 ملل ماء مقطر.
10-       محلول كلوريد الصوديوم 1% : 1جم كلوريد الصوديوم تذاب في 100 ملل ماء مقطر .
11-  يمكن استخدام إنزيمات جاهزة من السوق لإجراء التجارب الخاصة بالهضم ويمكن استخدام دواء من الصيدلية محتوٍ على الإنزيمات .
12-       محلول منظم : يوجد محاليل منظمة على شكل أقراص لكل منها حامضية معينة .
13-       حمض الخليك 10 % : 10 ملل حمض خل مركز تضاف إلى 90 ملل ماء مقطر .
14-       محلول يوديد البوتاسيوم 2% : 2 جم  يوديد البوتاسيوم تذاب في 100 ملل ماء مقطر .
15-       حامض الهيدروكلوريك 0.4 % : 0.4 ملل من الحمض تضاف إلى 100 ملل ماء مقطر
16-  الفيبرين : يوزن 0.5 جم من صبغة أحمر كونغو تذاب في 90 ملل ماء مقطر ويضاف لها     10 ملل كحول إيثيلي مطلق , يضاف لهذا المحلول مسحوق الألبيومين حتى يصبح كثيفاً ثم يسخن عند 80 ْم لمدة 10 دقائق ثم يترك الخليط حتى يبرد ثم يقطع إلى قطع صغيرة ثم يجفف في درجة حرارة الغرفة تماماً .
17-       محلول الكازيين 1% : 1 جم من الكازيين , 0.1 جم كربونات الصوديوم تذاب 100 ملل ماء مقطر .
18-       حمض البوريك 2% : 2 جم حمض البوريك تذاب في 100 ملل ماء مقطر.


ثانياً : المواد اللازمة للكشف عن مكونات البول :

1- كربونات الصوديوم 0.5 % : 0.5 جم كربونات الصوديوم تذاب في 100 ملل ماء مقطر .
2- نترات الفضة 0.01 ع : 0.17 جم نترات فضة تذاب في 100 ملل ماء مقطر .
3- مولبيدات أمونيوم : 25 جم مولبيدات أمونيوم تذاب في 200 ملل ماء مقطر , يضاف إلى 10ع حمض الكبريتيك ( يحضر الحمض بإضافة 270 ملل من الحمض المركز إلى 98 ملل ماء مقطر).
4- حمض البكريك المشبع : يذاب مسحوق حمض البكريك إلى 100 ملل ماء مقطر حتى يبدأ بالترسب في قاع الوعاء المحضر فيه .
5- ماء الجير هو هيدروكسيد الكالسيوم ويحضر بتركيز 2% .
6- كلوريد الباريوم 5% : 5 جم كلوريد الباريوم تذاب في 100 ملل ماء مقطر .
7- نيتروبروسيد الصوديوم 2% : 2 جم نيتروبروسيد الصوديوم تذاب في 100 ملل ماء مقطر.


ثالثاً : المواد اللازمة في تجارب الدم :

1- محلول كلوريد الصوديوم 0.9 % : 0.9 جم كلوريد الصوديوم تذاب في 100 ملل ماء مقطر .
2- محلول كلوريد الصوديوم 10% : 10 جم كلوريد الصوديوم تذاب في 90 ملل ماء مقطر .
3- حمض الهيدروكلوريك 0.1 ع : 8.5 ملل حمض هيدروكلوريك المركز تضاف إلى 992.5 ملل ماء مقطر .
4- صبغة الجنشيان البنفسجي 1% : 1 جم من مسحوق صبغة الجنشيان البنفسجي في 100 ملل من حمض الخليك الثلجي .      

تجارب عملية على القلب Heart tests


تمهيد :
هناك الكثير من المعلومات التي يمكن الحصول عليها والتعرف من خلالها على وظيفة القلب من خلال صوت القلب ويعتمد ذلك على الخبرة .
وللقلب صوتين أساسيين يحدث الأول عند الإنقباض البطيني والآخر عند الإنبساط .
والقلب بما أنه عضلة فيمكن قياس حركته الإنقباضية من خلال تسجيل ذلك على جهاز الكيموجراف كما سبق وكذلك يمكن دراسة بعض العوامل المؤثرة على انقباض العضلة القلبية مثل درجة الحرارة وبعض الهرمونات مثل الأدرينالين .

أولاً : تسجيل ضربات القلب للضفدع بواسطة الكيموجراف :
1-  تحدد منطقة الإتصال من الجمجمة والعمود الفقري ثم تدخل إبرة التشريح في الثقب الكبير ثم يخرب الدماغ والحبل الشوكي ويتجنب إزالة الإبرة لمنع النزف ويصبح جسم الضفدع مشلولاً .
2-  توضع الضفدعة على ظهرها على اللوحة وتثبت الأطراف الأربعة بدبابيس ويقطع جدار البطن الأمامي ويتجنب إصابة الأحشاء حتى عظمة القص التي تزال باحتراس ويستمر في القطع حتى الفك السفلي والكشف عن القلب وإزالة التامور .
3-  يمرر خطاف خلال جدار قمة البطين ويوصل الخطاف بخيط بالمؤشر ويسجل ضربات القلب على الأسطوانة المعدة على الحركة البطيئة لجهاز التسجيل . ويلاحظ انتظام ضربات القلب .
4-           يفصل كل القلب من الجسم ويوضع في طبق زجاجي به محلول رينجر ويلاحظ هل يستمر النبض .
5-           تسجل الملاحظات في لون البطين خلال الإنقباض والإنبساط ويقارن بين تناسق ضربات القلب قبل القطع وبعده .
6-           ميز أربعة مراحل لحركة القلب تعبر عن :
-         تقلص الأجوف الوريدي .
-         الأذينين .
-         البطين .
-         الشريان القلبي .
 



 




ثانياً : دراسة تأثير درجات الحرارة على ضربات القلب
1-          خفض سرعة دوران الدرم إلى 2ملم/ثانية .
2-          سجل على الجهاز ( الكيموجراف ) ضربات القلب عند درجة حرارة الجسم العادية .
3-          أضف محلول رينجر عند درجة حرارة 5 ْم ثم سجل النتيجة .
4-          أضف محلول رينجر عند 20 ْم ثم سجل النتيجة .
5-          كرر العملية عند درجات حرارة 30 , 35 , 40 , 45 درجة مئوية وسجل النتيجة في كل مرة .
ملاحظة : استعن بتسجيل النتائج مرفقة بالرسم .

ثالثاً : التأثير الكيميائي على القلب ( تأثير الأسيتيل كولين والأدرينالين )
1-          بعد الكشف عن القلب تسجل بعض نبضات القلب العادية على الكيموجراف .
2-          توضع بضع قطرات من محلول الأدرينالين على القلب وتسجل الملاحظات ونبضات القلب .
3-          يغمر القلب عدة مرات في محلول رينجر للتخلص من آثار الأدرينالين وتسجل ضربات القلب العادية.
4-          توضع عدة قطرات من محلول أسيتيل كولين بدون توقف الأسطوانة على القلب وتسجل الملاحظات.

رابعاً : قياس ضغط الدم الشرياني Measuring of blood pressure  :

       يضخ الدم في الشرايين من البطينين نتيجة انقباضهما فيحدث بذلك ضغطاً في الجهاز الوعائي .
   كما يحدث ارتداد الأوعية الدموية والتي سبق أن تمددت نتيجة ضخ الدم فيها .
       ويسمى أعلى ضغط يمكن تسجيله خلال الدورة القلبية بالضغط الإنقباضي , أما أقل ضغط يمكن تسجيله فيسمى الضغط الإنبساطي ويعتمد ضغط الدم الشرياني على عدة عوامل :
-         حجم الدم الذي يضخه القلب .
-         حجم الدم الكلي في الجهاز الوعائي .
-         المقاومة الطرفية .
-         مرونة جدران الأوعية الدموية .

طريقة العمل :
1-          توضع القطعة التي تطوق الذراع من جهاز ضغط الدم حول أعلى الذراع .
2-          تفرغ من الهواء الموجود بها عن طريق فتح الصمام القريب من الإنتفاخ المطاطي للجهاز .
3-          يتم لمس الشريان الكعبري لتحسس النبض ويرفع الضغط حتى يختفي النبض في الشريان .
4-  يخفض الضغط مرة أخرى في القطعة المطوقة للذراع حتى يسمح بمرور الضغط مرة أخرى إلى طرف اليد ويعود النبض من جديد وتكون القراءة على عمود الزئبق في هذه الحالة مساوية لقيمة الضغط الإنبساطي وتسمى بطريقة اللمس .
5-  يمكن استخدام السماعة الطبية بعد تحسس نبض الشريان العضدي ولف القطعة حول الذراع ورفع الضغط 30 مم زئبق أعلى من قيمة ضغط الدم الإنقباضي ( من الخطوة 4 ) ثم ترك الضغط ينخفض تدريجياً لسماع الصوت من على الشريان العضدي وهو صوت حاد وواضح ويكون ناتج عن عودة جريان الدم وتكون القراءة على عمود الزئبق هي ضغط الدم الإنقباضي .
6-             يستمر تخفيض الضغط في القطعة العضدية حتى يختفي الصوت المسموع .
7-             تسجل القراءة على عمود الزئبق وتكون عند ذلك مساوية لقيمة الضغط الإنبساطي .
8-          يمكن تكرار العمل بعد القيام بمجهود لملاحظة الفرق .
وتجدر الإشارة أن هناك أجهزة رقمية متعددة لقياس ضغط الدم .

دراسة انقباض العضلات Muscle contraction واستخدام جهاز الكيموجراف Kymograph


تجري في هذه الدراسة اختبارات للإستجابة response الميكانيكية للعضلات الهيكلية لبعض المحفزات وتعتمد على استخدام جهاز تسجيل الحركة (الكيموجراف Kymograph ) حيث يحوي على حامل يعمل على تكبير حركة العضلة ثم رسمها على ورق متصل بالجهاز .
وتعتمد عملية الإنقباض والإنبساط في العضلات على عدة عوامل :
1-      الناقل العصبي أسيتيل كولين حيث يؤثر على اللييفة العضلية فيحدث التقلص .
2-      بروتينات التروبوميوسين و الميوسين و الأكتين الداخلة في تركيب اللييفات العضلية والتي تتأثر بالمحفزات العضلية .
3- أيونات الكالسيوم التي لها القدرة على الحركة داخل وخارج الخيوط العضلية فتؤثر على البروتينات التي تعمل على انقباض وانبساط العضلات اعتماداً على المؤثر العصبي .
ويوجد عدة أنواع من التقلص العضلي :
1- المنبه الحدي والمنبه الأقصى : حيث أن لكل عضلة انقباض لحد معين .
2- التقلص النفضي (الإستجابة لمنبه واحد ) : بحيث تحدث الإستجابة لمنبه واحد على شكل نفضة وتتم سريعاً على ثلاث مراحل :
-            مرحلة الكمون : فترة تحرير أيونات الكالسيوم :
-            مرحلة التقلص .
-            مرحلة الإرتخاء .
  3- الإستجابة للمنبهات المتعاقبة : يحدث نتيجة تعرض العضلة لعدة منبهات فتتقلص العضلة نتيجة لذلك .
طريقة العمل :
1- ضع جهاز الكيموجراف في الحالة المحايدة neutral حتى يتسنى   تحريك الدرم (الموجود عليه ورق الرسم ) يدوياً .
2-      اضبط جهاز التحفيز ليعطي صدمات كهربية بقوة صفر (يمكن استخدام محفزات كيميائية مثل الأدرينالين ) .
3- إرفع العصب على القطبين الكهربيين فوق سطح محلول رينجر Ringer .
4- إعط صدمات متزايدة القوة حتى تحصل على استجابة تسجل على الدرم – سجل قوة التحفيز عند أقل حركة يمكن تسجيلها .
5-    حرك الدرم لمسافة 5 ملم ثم حفز العضلة بقوة أعلى من اللازمة لأقل حركة ( سجل الحركة وقوة التحفيز ) .
6-      كرر العملية في 5 حتى تصل لمرحلة لا تحدث فيها زيادة قوة التحفيز أية إضافة لقوة الإنكماش .



7-      اسحب الأقطاب من تحت العصب وضعها على العضلة نفسها .
8-      أعد جهاز التحفيز لدرجة الصفر ثم أعد التجربة .
ملاحظة : يمكن دراسة تأثير شدة المؤثر على قوة الإنقباضة وكذلك دراسة الإنقباضة العضلية البسيطة ودراسة استجابة العضلة للمؤثرات المتتالية .
عن طريق التغيير في قوة المؤثر أو عن طريق زيادة عدد مرات التأثير على العضلة.

تحضير العضلة الساقية البطنية مع العصب الوركي :
1-           خدر الضفدعة أو اضربها ضربة قوية على مؤخرة الرأس أو دمر المخ عن طريق التنخيع .
2-           اقطع جسم الضفدع بالعرض على مسافة قصيرة أسفل الطرفين الأماميين .
3-           اسلخ الجلد للقطعة السفلى من الجسم .
4-           اربط وتر اكليس بخيط طوله قدم تقريباً هذا الخيط الذي ستربط به العضلة بالرافعة .
5-           افصل العضلة الساقية البطنية ومعها الوتر حتى مفصل الركبة .
6-           اقطع في الساق خلال العظم القصبي الشظوي تحت العضلة وأسفل الركبة مباشرة .
7-           حاول تسليك العصب الوركي Sciatic nerve خلال العضلات الظهرية للفخذ وحتى منطقة العمود الفقري .
8-  لا تضغط على العصب بالملقط وتحته تماماً اقطع عظم الفخذ بعد مفصل الركبة بحوالي نصف بوصة حيث يشبك هذا الجزء من عظم الفخذ بمشبك العضلة .
9- حاول فصل الضفيرة الوركية مع الفقرات المجاورة لها وذلك بقص العمود الفقري .
10- ضع العضلة في محلول رينجر ( محلول فسيولوجي تركيز 6.5 جم/لتر ) ويحافظ على العضلة رطبة بإضافة محلول رينجر كل فترة .



عد كريات الدم Blood cell count الحمراء والبيضاء


     كثيراً ما تدعو الحاجة إلى معرفة عدد الكريات الدموية الحمراء وكذلك البيضاء . ويمكن إنجاز ذلك على الرغم من كثرة عدد الكريات الدموية بسهولة نسبية وذلك بطريقة التخفيف.
     لقد شاع في السنوات الأخيرة استعمال أجهزة إلكترونية لعد الكريات الدموية الحمراء والبيضاء ، تدعى بحاسبة الخلايا الدموية Blood cell counter  توضع فيها عينة الدم ويضغط على زر فتظهر أرقام تمثل عدد الكريات الدموية الحمراء والبيضاء في الملليمتر المكعب الواحد .
    ولكن الجهاز الكلاسيكي والذي لا يزال يستخدم في أكثر المختبرات هو مقياس الخلايا الدموية Haemocytometer  . يتألف الجهاز من ماصتين إحداها ذات خرزة حمراء تستعمل لتخفيف الدم عند عد كريات الدم الحمراء . لاحظ وجود التقسيمات ابتداءاً من نهاية الماصة إلى أعلاها : 0.5 ، 1 ، 101 . وهذه الأرقام تمثل حجم الفراغ داخل الماصة بالملليمترات المكعبة .أما الماصة الأخرى فتحتوي على خرزة بيضاء وهي تستخدم لتخفيف الدم عند عد الخلايا الدموية البيضاء . لاحظ التقسيمات التالية 0.5 ، 1، 11 وهي أيضاً بالملليمترات المكعبة . توجد أيضاً في الجهاز قطعة متصلة بأنبوبة مطاطية تستخدم لسحب الدم إلى داخل الماصتين . أهم جزء في الجهاز هو صندوق العد counting chamber والذي هو عبارة عن شريحة زجاجية سميكة توجد في مسرحها الوسطي تقسيمات مـــــربعة مجهــــــرية . هذه التقسيمات ثــــلاثة أنــــواع هي المربع 

الكبير والذي يقسم إلى 25 مربع متوسط وكل مربع متوسط مقسم بدوره إلى 16 مربع صغير أي أن هناك  ( 16 X 25 )  400 مربع صغير في المربع الكبير .

قبل كل شيء نظف الشريحة وافحصها تحت القوة المجهرية الصغرى لتتعرف على المربع الكبير والمربعات المتوسطة والمؤلفة من 16 مربع صغير . لاحظ بأن الحدود الخارجية للمربع المتوسط مؤلفة من ثلاثة خطوط أما المربعات الصغيرة مفصولة عن بعضها بخطوط مفردة فقط .

طريقة الحساب :
مربع الحساب = 25 مربعاً صغيراً في كل منها مربع أصغر = 400 مربع .
مساحة كل مربع من هذه المربعات = 1/2 * 1/2 = 1/400 مم2 .


الإرتفاع من غطاء الشريحة = 0.1 مم
-         القانون العام لعد كريات الدم = عدد كريات الدم في المربعات / ( عدد المربعات X الحجم X التخفيف )



جهاز نيوياور Newyauer :
- عد كريات الدم الحمراء
16 مربع صغير في 5 مربعات متوسطة = مجموع كريات الدم الحمراء ( س )
                            عدد كريات الدم في 80 مربع = س
عدد كريات الدم الحمراء = س/ 80 X 4000 X 200
- لعد كريات الدم البيضاء
16 مربع كبير في كل 4 مربعات متوسطة = مجموع كريات الدم البيضاء ( ب )   64 - ب
                               حجم كل مربع= 1/4 X 1/4 X 0.1 = 160
                      عدد كريات الدم البيضاء = ب/ 64 X 160 X 20
طريقة العمل :
أ - عد كريات الدم الحمراء  RBC:
1 – نظف ثم جفف الماصة ذات الخرزة الحمراء .
2 – اسحب كمية من الدم حتى العلامة 0.5 إذا ارتفع الدم عن هذه العلامة تخلص من الزيادة بوضع قطعة من ورق نشاف عند طرف الماصة .
3 – جفف طرف الماصة جيداً ثم ضعها في سائل التخفيف ( 0.9% محلول فسيولوجي ) وامتص كمية من هذا السائل حتى العلامة 101 .
4 – افصل الأنبوبة المطاطية ثم امسك طرف الماصة بواسطة إصبعي السبابة والإبهام ثم اخلط الدم بالمحلول المخفف جيداً بتحريك الماصة بين الإصبعين لمدة دقيقة تقريباً .
5 – تخلص من أول قطرتين باستخدام ورق نشاف , ثم ضع قطرة من الدم المخفف على شريحة العد في جهاز الهيموسيتوميتر ، ثم غطي الشريحة بغطائها الزجاجي مع تجنب دخول فقاعات هوائية تحت الغطاء لأن ذلك يحدث خطأ في العد .
ملاحظة : اترك العينة على الشريحة لمدة دقيقتين حتى تتوزع الخلايا على الشريحة جيداً . 
6– عد كريات الدم الحمراء الموزعة في خمس مربعات متوسطة  متتالية على أن يتم عد كريات الدم الحمراء الموزعة داخل المربع المتوسط إلى جانب عد الكريات الموجودة على الضلع الأيسر والأسفل من هذا المربع وإهمال ما يوجد من كريات دموية على الضلع الأيمن والعلوي . أي يكون العد على الحواف التي تشبه شكل حرف L . ثم احسب متوسط ما يوجد في كل مربع . 

ب - عد كريات الدم البيضاء WBC :
اتبع نفس الطريقة السابقة المستعملة في عد كريات الدم الحمراء ما عدا الفروق التالية :
1 – نظف ثم جفف الماصة ذات الخرزة البيضاء .
2 – اسحب كمية من الدم حتى العلامة 0.5 ثم اسحب كمية من هذا السائل المخفف حتى العلامة 11.
3 – استعمل محلول مخفف من صبغة الجينشيان البنفسجي 1% في حمض الخل ، يقوم هذا المحلول بتحليل الكريات الدموية الحمراء جميعها ويصبغ في نفس الوقت أنوية الخلايا الدموية البيضاء وبذلك يسهل تميزها.
4 - يحسب عدد كريات الدم البيضاء في 64 مربع صغير الموجودة على أطراف الشريحة الخاصة بعد الكريات الدموية .
- يحسب متوسط عدد الكريات الدموية البيضاء الموجودة في مربع واحد .
- ليكن عدد الكريات الدموية المحسوبة في 64 مربع = ص  
- متوسط عدد الكريات الدموية في المربع الواحد
 ( س ) = ص/ 64
- عدد الكريات الدموية البيضاء في الدم الأصلي /سم3 =  
س X 160 X 20 ( التخفيف )



التقدير اللوني لنسبة الهيموجلوبين (تعيين كمية الهيموجلوبين) في الدم ( طريقة سهلي Sahli method )


هناك طرق عديدة لتعيين كمية الهيموجلوبين في الدم أهمها الطريقة التي تعتمد على تحويل الهيموجلوبين إلى مشتق ذو لون ثابت ومن ثم قراءة هذا اللون بطريقة أو بأخرى . هناك طرق لونية عديدة لتعيين الهيموجلوبين أسهلها وأسرعها طريقة سهلي Sahli method .   
طريقة سهلي Sahli method  
- يتألف جهاز سهلي من أنبوبة مدرجة وماصة شعرية ذات سعة 20 ملم وقضيب زجاجي رفيع وأخيراً زجاجة ملونة قياسية . وكذلك يحتوي الجهاز على قنينة صغيرة تحتوي على 0.1 ع حمض الهيدروكلوريك مزودة برأس ذو قطارة . تحمل الأنبوبة المدرجة نوعين من التقسيمات إحداهما يعبر عن الهيموجلوبين بنسبة مئوية من الكمية الطبيعة ، لذا فإن التقسيمات تبدأ من الصفر في أسفل الأنبوبة إلى 140 بالقرب من نهايتها العليا . الحد الأدنى للنسبة المئوية المقبولة والتي تعتبر طبيعية هي 70 % أما التقسيمات الأخرى فتعبر عن الكمية المطلقة من الهيموجلوبين بالنسبة المئوية أي عدد الجرامات من الهيموجلوبين في 100 سم3 من الدم . الكمية الطبيعية هي 15 جم/ 100 سم3 والحد الأدنى الذي يمكن أن تعتبر طبيعياً هو 11جم/100 سم3 ويستخدم لهذا القياس جهاز يسمى بالهيموجلوبينوميتر  Haemoglobinometer.

الطريقة :
1 – ضع 5 قطرات من محلول 0.1 ع حامض الهيدروكلوريك في الأنبوبة المدرجة مع الجهاز .
2 – املأ بدقة الماصة المتصلة بأنبوب من البلاستيك إلى العلامة 20 جم بالدم المطلوب تعيين كمية الهيموجلوبين فيه .
3 – أنقل محتويات الماصة إلى الأنبوبة المدرجة ثم اغمس طرفها في محلول الهيدروكلوريك العياري
4 – اغسل الماصة بامتصاص قدر من الماء المقطر ثم إضافة هذا الماء بعد ذلك إلى محتويات الأنبوبة المدرجة حتى تحصل على لون بني متجانس من الهيموجلوبين الحمضي .
5 – ضع الأنبوبة المدرجة في جهاز قياس الهيموجلوبين ثم خفف المحلول البني بإضافة نقط من الماء المقطر بين لحظة وأخرى حتى تحصل على لون يطابق اللون القياسي الموجود في الجهاز ، عند ذلك توقف عن إضافة الماء ، عند التقليب يستخدم القضيب الزجاجي المرفق مع هذا الجهاز .
6 – خذ القراءة المواجهة لسطح المحلول في الأنبوبة المدرجة واحسب كمية الهيموجلوبين بالنسبة المطلقة وكذلك بالنسبة جم / سم3 .